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Expression endogène humaine de superantigène de rétrovirus-K et de virus de l’herpèsvirus humain et de l’herpès humain – virales chez les patients souffrant de fatigue chronique

Contexte Syndrome de fatigue chronique Le syndrome de fatigue chronique est une maladie complexe et hétérogène caractérisée par une fatigue débilitante qui ne s’améliore pas avec le repos au lit et s’aggrave après une activité physique ou un effort mental Malgré une recherche approfondie sur une cause de SFC, aucune étiologie définitive n’a été déterminée. Cependant, un grand pourcentage de patients atteints de SFC ont noté un événement infectieux aigu qui déclenche leur fatigue. Méthodes Le sang et la salive ont été prélevés sur des cas de SFC et des sujets témoins sains. Les cellules mononucléaires du sang périphérique ont été testées pour un transcriptome endovasculaire endovasculaire K HERV-K env. réaction quantitative en chaîne par polymérase qPCR De plus, le nombre de copies virales de l’herpèsvirus humain- HHV- et de l’herpèsvirus humain- HHV- a été mesuré à la fois dans la salive et les PBMC à l’aide de qPCRs TaqMan Les niveaux de transcription et le nombre de copies virales ont été comparés au patient. Les transcriptions env HERV-K n’étaient pas corrélées avec le nombre de copies virales HHV ou le nombre de copies virales HHV dans les PBMC ou le nombre de copies virales HHV-salive et le nombre de copies virales HHV-. dans les PBMC et la salive n’étaient pas significativement différents entre les sujets témoins en bonne santé et les patients atteints du SFC HERV-K env les transcrits, le nombre de copies virales HHV et le nombre de copies virales HHV ne sont pas corrélés avec la sévérité des symptômes du SCFConclusions Nous ne démontrons pas de différence dans les transcrits HERV-K env, le nombre de copies virales HHV et le nombre de copies virales HHV entre les patients atteints du SFC et les contrôles sains Nos données ne supportent pas l’hypothèse de réactivation de HHV- ou HHV- dans CFS

CFS, HERV-K, HHV-, HHV-Syndrome de fatigue chronique Le syndrome de fatigue chronique est une maladie complexe et hétérogène affectant plus de millions d’Américains Les patients atteints de SFC ont une fatigue accablante qui ne s’améliore pas avec le repos au lit. Les symptômes du SFC comprennent une altération de la mémoire, des maux de gorge, des ganglions lymphatiques douloureux cervicaux ou axillaires, des douleurs musculaires, des douleurs articulaires et des céphalées Malgré des recherches approfondies sur une cause du SFC au cours des dernières décennies, aucune cause définitive n’a été déterminée. ; Un important pourcentage de patients atteints de SFC note un événement infectieux aigu qui déclenche leur fatigue Des rapports antérieurs ont tenté de lier les β-herpesvirus omniprésents, l’herpèsvirus humain – HHV – et l’herpèsvirus humain – HHV -, Plusieurs chercheurs ont signalé que la réactivation du HHV est plus fréquente chez les patients atteints de SFC que chez les témoins sains, comme en témoignent les titres plus élevés d’anticorps IgG de l’immunoglobuline G, par l’immunoglobuline M IgM, par la présence d’acide nucléique viral dans des cellules mononucléaires du sang périphérique ou des plasmocytes, par des mesures de charge virale dans les PBMC, ou en observant l’effet cytopathogène viral dans les lymphocytes des patients. Cependant, d’autres études n’ont pas observé de telles différences entre les patients CFS et les sujets témoins sains. Les résultats sont difficiles à interpréter car les infections à HHV et HHV sont répandues dans la population générale avec des c Les anticorps IgG détectés chez plus de% des adultes En outre, les symptômes de l’infection déclencheuse sont généralement éliminés avant que les patients reçoivent un diagnostic de SFC. cellules et est devenu définitivement intégré dans le génome Environ% du génome humain entier est considéré comme HERVs; cependant, la plupart de ces gènes proviraux sont réduits au silence ou seulement exprimés en réponse à un facteur environnemental, comme un virus infectant qui peut les activer dans les cellules sensibles Récemment, il a été montré que le gène env HERV-K peut être activé dans B cellules par virus Epstein-Barr EBV, interféron-α IFN-α, HHV-A et HHV-B Cette protéine d’enveloppe comprend un superantigène SAg, qui est reconnu par le produit du gène TCR du récepteur de la cellule Vβ humaine Les SAgs sont des protéines microbiennes qui stimulent fortement le système immunitaire en interagissant directement avec le segment Vβ du TCR, contrairement aux antigènes peptidiques classiques reconnus par une région hypervariable spécifique du TCR, qui est différente dans chaque clone de lymphocytes T. pourrait conduire à un dysfonctionnement immunitaire et les symptômes de CFSIn l’étude actuelle, nous avons comparé le nombre de copies de HHV- et HHV- dans la salive, et PBMC de patients atteints de SFC et des contrôles sains, afin de déterminer si les titres viraux élevés De plus, nous avons mesuré les niveaux de transcription de HERV-K env pour rechercher une association possible avec CFS. Nous n’avons trouvé aucune différence statistiquement significative entre les nombres de copies virales et les niveaux de transcrits HERV entre les témoins sains et les patients atteints du SFC. cohorte

MATÉRIAUX ET MÉTHODES

Cohorte de patients

Quarante cas de SFC et sujets témoins en bonne santé ont été recrutés par l’un d’entre nous. ALK, clinicien et enquêteur du SCF depuis des années. Les cas provenaient d’une cohorte systématiquement suivie depuis des années. Tous les cas rencontraient les Centers for Disease Control and Prevention Critères du CDC pour le SCF à l’entrée de l’étude La réanalyse révèle que le cas n’a pas satisfait aux critères du CDC, mais la suppression des données de ce patient n’a pas changé les résultats Des contrôles sains ont été sollicités à partir des publicités postées à Brigham and Women vérifier l’état de santé et ne pas avoir les symptômes du SFC Chaque sujet témoin a été apparié par sexe et âge dans les années à un cas de SFC Un des témoins sains a été retiré de l’étude parce qu’il était suspecté d’avoir un HHV intégré sur le plan chromosomique -Blood et la salive ont été recueillies à partir de cas et de sujets témoins dans la pratique ambulatoire de Brigham & amp; Des échantillons de salive BWH ont été collectés en utilisant un protocole précédemment développé impliquant rinçage de bouche et gargariser avec mL de PBS saline tamponnée au phosphate Les échantillons ont été codés de sorte que les cas et les contrôles ne pouvaient pas être déterminés par le personnel du laboratoire. Les échantillons de sang ont été immédiatement congelés à-° C jusqu’au traitement. Au moment de la collecte des échantillons, les patients ont été interrogés pour déterminer la gravité de leur fatigue, comme décrit plus en détail par la suite. les participants ont donné leur consentement éclairé conformément aux protocoles approuvés par l’Institutional Review Board pour la recherche avec des sujets humains à BWH

Traitement du sang

Les PBMC ont été isolées du sang avec Ficoll GE Healthcare en utilisant des protocoles de laboratoire précédemment publiés Après isolement, les PBMC ont été lavées avec du PBS selon un rapport et comptées en utilisant un microscope optique et un hémocytomètre. Les PBMC ont été aliquotées à x cellules par tube, centrifugées et remises en suspension en μL de tampon RLT Plus% de β-mercaptoéthanol; Les échantillons de Qiagen ont été stockés dans ce tampon de lyse à – ° C

Isolement de l’ADN et de l’ARN

L’ADN et l’ARN ont été isolés à partir de PBMC en utilisant les procédures fournies par le mini kit ADN / ARN AllPrep Qiagen Au total, μL de lysat x cellules PBMC dans le tampon RLT ont été placés sur la colonne de centrifugation ADN. La colonne a ensuite été transférée dans un nouveau tube collecteur et mise de côté jusqu’à ce que l’ARN soit isolé. Le flux continu a été utilisé pour isoler l’ARN. En somme, on a ajouté de l’éthanol à l’écoulement, bien mélangé et placé sur un Colonne de centrifugation ARN Après avoir terminé les procédures du fabricant pour les colonnes Qiagen et ARN, l’ARN et l’ADN isolés ont été stockés sur de la glace jusqu’à ce que la concentration soit déterminée à l’aide d’un spectrophotomètre Thermo Scientific Nanodrop. réaction en chaîne par polymérase PCR testADN a été isolé à partir du lavage de la salive en utilisant le protocole supplémentaire QIAGEN à la procédure QIamp DNA Blood Mini Kit Qiagen Le lavage de la salive a été centrifugé à g pendant quelques minutes Le surnageant a été mis au rebut et le culot a été remis en suspension dans du PBS μL 20 μL de protéase QIAGEN et du tampon AL ont été ajoutés et mélangés immédiatement par vortex pendant quelques secondes. Les échantillons ont ensuite été incubés à ° C pendant quelques minutes. l’échantillon et mélangé par vortex L’échantillon entier a ensuite été ajouté à une colonne QIAamp Spin Après avoir terminé les procédures du fabricant pour la colonne QIAamp Spin, l’ADN isolé a été conservé à – ° C jusqu’à un test de PCR.

Réaction Quantitative en Chaîne Polymérase Quantitative HHV- quantitative en temps réel qPCR

Les amorces et les sondes, conçues par Karlsson et al , ont été commandées chez Applied Biosystems. Voir la table pour les séquences La séquence cible pour le qHRC-HHV a été choisie dans une région conservée du gène HHV-U, qui correspondait parfaitement aux deux HHV -A et HHV-B La sensibilité analytique et la plage de détection linéaire du test correspondent à des copies du génome – × HHV- par réaction PCR eczéma. Ceci a été déterminé en utilisant un contrôle d’ADN viral quantifié par D Ablashi de la Fondation HHV. pour les qPCR de Taqman contenaient des biosystèmes appliqués de mélange maître d’expression génique, nM amorces sens et antisens, nM sonde, et ng d’ADN dans un volume de réaction de μL Une courbe standard utilisant l’ADN viral HHV quantifié a été appliquée sur chaque plaque Le contrôle et l’eau comme contrôle négatif Les conditions du thermocycleur étaient de ° C pendant des minutes, suivies de cycles de ° C pendant quelques secondes puis de ° C pendant une minute en utilisant les plaques de réaction optiques Applied Biosystems sur un système de PCR en temps réel. Biosystèmes appliqués Toutes les réactions ont été effectuées en triple La qualité de l’ADN a été évaluée, en utilisant un qPCR TaqMan pour le gène s dans la même réaction Applied Biosystems

Tableau Premières amorces et sondes TaqMan utilisées pour les réactions quantitatives en chaîne de la polymérase Séquence de noms d’amorces / sondes HHV-forward ‘-CCC GAG CGC TAG GTT GAG-‘ HHV- reverse ‘-AAC GCT CGT CAC AAA CAT AAA ATT C-‘ Sonde HHV- FAM-ATG GAA ACG CCT ACA C-MGB- ‘HHV-AB avant’ -CTA AGG TGA GCC AGA TTC G- ‘HHV-AB inverse’ -GAA TAC CCA CAG GCA CTC C- ‘Sondes HHV-A’ -VIC -TGC AGC CAT TTC TTT GGA AAG C-TAMARA- ‘Sonde HHV-B’ -FAM-TGC AGC CAC CTC CTT GGA AAG-TAMARA- ‘HHV- avant’ -AGA GCT TGC GTT GTG CAT GTT- ‘HHV- inverse’ -ATG TAC CAA TAC GGT CCC ACT TG- ‘HHV- sonde’ -FAM-CACGGCAATAACTCTAG-MGB- ‘HERV-K avant’ -CCG CCT TTT GAG CAG AAG TAT AAG A- ‘HERV-K inverse’ -CAG TAA TGG CAA TGC TGG CTA TG- «sonde HERV-K» -FAM-TAA GTC CTA CAG ACA AAC TT-MGB- «Primer / Probe Nom Séquence HHV- avant» CCC -CAG CGC TAG GTT GAG- «HHV- inverse» -AAC GCT CGT CAC AAA CAT AAA ATT C- ‘HHV- sonde’ -FAM-ATG ATC GAA ACG CCT ACA CM GB- ‘HHV-AB forward’ -CTA AGG TGA GCC AGA TTC G- ‘HHV-AB reverse’ -GAA TAC CCA CAG GCA CTC C- ‘Sondes HHV-A’ -VIC-TGC AGC CAT TTC TTT GGA AAG C- TAMARA- ‘sonde HHV-B’ -FAM-TGC AGC CAC CTC CTT GGA AAG-TAMARA- ‘HHV- avant’ -AGA GCT TGC GTT GTG CAT GTT- ‘HHV- inverse’ -ATG TAC CAA TAC GGT CCC ACT TG- ‘Sonde HHV’ -FAM-CACGGCAATAACTCTAG-MGB- ‘HERV-K avant’ -CCG CCT TTT GAG CAG AAG TAT AAG A- ‘HERV-K inverse’ -CAG TAA TGG CAA TGC TGG CTA TG- ‘HERV-K sonde ‘-FAM-TAA CGT CTA CAG ACA AAC TT-MGB-‘ Abréviations: HERV, retroviruse endogène humaine; HHV-, herpesvirus humain-; HHV-, herpesvirus humain-View Large

PCR spécifique au sous-type pour HHV-A et HHV-B

Lou et al. Les gènes de l’ADN polymérase U ont été sélectionnés comme gènes cibles Trois nucléotides diffèrent entre les souches dans la région sélectionnée voir Tableau L’extrémité des sondes pour HHV-A et HHV-B a été marquée avec le colorant rapporteur fluorescent VIC et -carboxyfluorescéine FAM, respectivement, tandis que l’extrémité a été éteinte avec des carboxaméthylamphétamines TAMRA et des sondes ont été synthétisées par Applied Biosystems. et les conditions du thermocycleur étaient les mêmes que celles du HHV-qPCR voir ci-dessus Tous les échantillons ont été testés en triple La qualité de l’ADN a été évaluée en utilisant un qPCR de Taqman pour le gène s dans la même réaction L’ADN standard de Applied Biosystems HHV-A et HHV-B était utilisé comme contrôles positifs

Temps réel quantitatif HHV- qPCR

Les amorces et la sonde ont été choisies dans les séquences du gène U ​​conservées montrées dans le tableau. La fin de la sonde a été marquée avec le colorant rapporteur fluorescent – les amorces FAM de la carboxymfluorescéine et la sonde ont été synthétisées. par Applied Biosystems Le mélange réactionnel et les conditions du thermocycleur étaient les mêmes que HHV-qPCR voir ci-dessus Tous les échantillons ont été testés en triple La qualité de l’ADN a été évaluée en utilisant un qPCR de Taqman pour le gène s dans la même réaction Applied Biosystems Quantitated HHV- DNA standard Advanced Biotechnologies, Inc a été utilisé pour faire une courbe standard pour chaque plaque Le seuil de sensibilité de ce test est le nombre de copies virales

RT-PCR en temps réel pour HERV-K env

ADNc complémentaire ADN a été généré à partir de ng d’ARN total en utilisant iScript reverse transcriptase Bio-Rad selon les instructions du fabricant La sonde TaqMan et les amorces spécifiques de la transcription transcriptionnelle de HERV-K ont été conçus pour reconnaître HERV-K env dans les cellules humaines par Hsiao Les conditions du mélange réactionnel et du thermocycleur étaient les mêmes que celles du HHV-qPCR voir ci-dessus. Le gène d’entretien HPRT a été utilisé pour mesurer la qualité de l’ADN Applied Biosystems La méthode ΔΔCt a été utilisée pour comparer l’expression relative de HERV- K env HERV-K env niveaux de transcrits ont été mesurés par rapport à un standard qui était toujours présent sur chaque plaque Tous les échantillons ont été testés en triple

Patient Interviews

Au moment de la collecte des échantillons, les patients atteints du SFC ont rempli un questionnaire sur les symptômes pour évaluer le niveau de fatigue. Plus précisément, on leur a posé des questions pour déterminer la gravité de leur fatigue. Ces questions sont les suivantes: Comment évaluez-vous votre fatigue au cours des dernières heures? À quel pourcentage de votre niveau de pré-maladie avez-vous fonctionné? Lequel des énoncés suivants décrit le mieux la gravité de votre fatigue au cours des derniers mois indiquant le plus de fatigue? Les énoncés suivants décrivent le mieux la gravité de votre fatigue au cours des derniers mois indiquant le plus de fatigue. Avez-vous été si fatigué que vous avez dû réduire votre niveau d’activité moyen inférieur à la moitié de votre niveau normal avant de devenir malade?

Statistiques

L’analyse statistique a été effectuée à l’aide de Microsoft Excel et SAS La comparaison des charges virales entre le groupe CFS et les contrôles sains a été réalisée à l’aide du test de Kolmogorov-Smirnov. Les corrélations entre les charges virales et les échelles de gravité des symptômes ont été testées.

RÉSULTATS

Quarante-huit échantillons aveugles – patients atteints de SFC et témoins sains – ont été analysés pour les différences dans les niveaux de transcrits HERV-K, le nombre de copies virales HHV et le nombre de copies virales HHV en utilisant les niveaux de transcrits qPCR HERV-K env en temps réel. par qRT-PCR Aucune différence dans les niveaux de transcription HERV-K n’a été détectée entre le groupe CFS et les témoins sains Figure HHV- nombre de copies virales a été mesurée dans des échantillons de salive ainsi que PBMCs Aucune différence dans le nombre de copies virales HHV PBMCs, respectivement Figure A et B Toutes les séquences virales HHV- du variant HHV-B HHV- Le nombre de copies virales a également été mesuré dans des échantillons de salive ainsi que des PBMC Aucune différence dans le nombre de copies virales HHV n’a été observée dans la salive ou les PBMC. Figure A et B Il y avait une tendance vers un nombre de copies HHV plus élevé dans les PBMC et vers un nombre plus faible de copies HHV dans les PBMC Aucune tendance n’était statistiquement significative, mais la puissance de cette étude était limitée

Figure View largeTélécharger les transcrits de K retrovirus endogène humain ont été mesurés dans les cellules mononucléaires du sang périphérique des contrôles sains et les patients atteints de syndrome de fatigue chronique Les niveaux de transcription sont relatifs à un échantillon standard Bar = moyenne ± erreur type de la moyenne Abréviations: CFS, syndrome de fatigue chronique; Les rétrovirus endogènes du rétrovirus humain ont été mesurés dans des cellules mononucléées du sang périphérique de témoins sains et des patients atteints de syndrome de fatigue chronique. Les niveaux de transcription sont relatifs à un échantillon standard. Bar = moyenne ± erreur-type de la moyenne Abréviations: CFS, chronique syndrome de fatigue; HERV, retrovirus endogène humain

Vue de la figure grandDownload slideHuman herpesvirus – HHV- nombre de copies virales a été mesurée en utilisant la réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel dans la salive A et les cellules mononucléaires du sang périphérique PBMC; B des témoins sains et des patients atteints du syndrome de fatigue chronique SFC A, Quatre des témoins sains et des patients atteints du SFC avaient des niveaux détectables de HHV- La copie virale Non représente des copies virales présentes dans un mL de lavage entier B, Six des témoins sains et des patients atteints du SFC niveaux détectables La copie virale Non représente les copies virales présentes dans ng PBMC Barres d’ADN = Moyenne ± erreur-type de la moyenne Abréviations: CFS, syndrome de fatigue chronique; HHV-, herpesvirus humain-; PBMC, cellule mononucléaire du sang périphériqueFigure GrandeDownload slideHuman herpesvirus- HHV- nombre de copies virales a été mesurée en utilisant la réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel dans la salive A et les cellules mononucléaires du sang périphérique PBMC; B des témoins sains et des patients atteints du syndrome de fatigue chronique SFC A, Quatre des témoins sains et des patients atteints du SFC avaient des niveaux détectables de HHV- La copie virale Non représente des copies virales présentes dans un mL de lavage entier B, Six des témoins sains et des patients atteints du SFC niveaux détectables La copie virale Non représente les copies virales présentes dans ng PBMC Barres d’ADN = Moyenne ± erreur-type de la moyenne Abréviations: CFS, syndrome de fatigue chronique; HHV-, herpesvirus humain-; PBMC, cellule mononucléée du sang périphérique

Vue de la figure grandDownload slideHuman herpesvirus – HHV- nombre de copies virales a été mesurée en utilisant la réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel dans la salive A et les cellules mononucléaires du sang périphérique PBMC; B des témoins sains et des patients atteints du syndrome de fatigue chronique CFS A, Neuf des témoins sains et des patients atteints du SFC avaient des niveaux détectables de HHV- La copie virale Non représente des copies virales présentes dans un ml de lavage B, Neuf des contrôles sains et des patients atteints du SFC niveaux détectables La copie virale Non représente les copies virales présentes dans ng PBMC Barres d’ADN = Moyenne ± erreur-type de la moyenne Abréviations: CFS, syndrome de fatigue chronique; HHV-, herpesvirus humain-; PBMC, cellule mononucléaire du sang périphériqueFigure GrandeDownload slideHuman herpesvirus- HHV- nombre de copies virales a été mesurée en utilisant la réaction en chaîne par polymérase quantitative en temps réel dans la salive A et les cellules mononucléaires du sang périphérique PBMC; B des témoins sains et des patients atteints du syndrome de fatigue chronique CFS A, Neuf des témoins sains et des patients atteints du SFC avaient des niveaux détectables de HHV- La copie virale Non représente des copies virales présentes dans un ml de lavage B, Neuf des contrôles sains et des patients atteints du SFC niveaux détectables La copie virale Non représente les copies virales présentes dans ng PBMC Barres d’ADN = Moyenne ± erreur-type de la moyenne Abréviations: CFS, syndrome de fatigue chronique; HHV-, herpesvirus humain-; Les PBMC, les patients atteints de CEM mononucléaire du sang périphérique ont été interrogés au moment de la collecte des échantillons afin de déterminer leur gravité. Les questions d’entrevue ont été conçues pour mesurer le niveau de fatigue ressenti par l’individu le jour du prélèvement sanguin et au cours du dernier mois. a été observé entre la sévérité des symptômes et les niveaux de transcription HERV-K ou les nombres de copies virales des données HHV ou HHV non montrées

DISCUSSION

fatigue plaine durable & gt; mois, et ils ont de ces symptômes: altération de la mémoire, maux de gorge, tendres ganglions lymphatiques cervicaux ou axillaires, douleurs musculaires, douleurs dans plusieurs articulations, nouveaux maux de tête, sommeil non réparateur, ou malaise après l’effort [,,,] Avec une population hétérogène de Bien que notre cohorte de patients ait été diagnostiquée par un expert du SFC ALK, il est toujours possible que les patients atteints du SFC puissent être divisés En outre, notre population de patients a été limitée à la région de Boston, Massachusetts, ce qui peut ne pas expliquer les différences régionales dans les agents infectieux qui peuvent être liés à des études CFSSome ont ont rapporté un nombre plus élevé de copies virales HHV dans les PBMC, ou d’autres signes d’infection HHV réactivée, chez les patients atteints de SFC [,, -, -] Cependant, d’autres études n’ont pas [,, ] Dans notre étude, il y avait une tendance vers des niveaux plus élevés de nombre de copies HHV dans les PBMC; la différence entre les patients atteints du SFC et les sujets témoins sains n’était pas statistiquement significative, bien que la puissance de notre étude était limitée. Il n’y avait aucune différence dans le nombre de copies HHV dans la salive entre les patients atteints du SFC et les témoins sains. De même, nous n’avons pas pu distinguer le nombre de copies virales HHV entre les patients atteints du SFC et les témoins sains. Par conséquent, il n’est pas surprenant que les scores de gravité des symptômes du patient du SFC ne montrent aucune corrélation avec le nombre de copies virales HHV ou HHV- Des études simples ont montré le potentiel de HERV-K pour coder une SAg qui pourrait perturber le système immunitaire SAgs sont des protéines microbiennes qui stimulent considérablement le système immunitaire en interagissant directement avec le Segment Vβ des antigènes peptidiques conventionnels TCR sont reconnus par une région hypervariable spécifique du TCR, qui est diffère nt dans chaque clone de lymphocytes T Puisqu’il n’y a que des gènes Vβ humains fonctionnels et des quantités infinies de régions hypervariables, un grand nombre de lymphocytes T peuvent être activés par une seule SAg. Il a déjà été montré que la SAV HERV-K peut être activée par EBV , IFN-α, et les deux variants HHV- Dans cette étude, nous avons émis l’hypothèse que les transcrits HERV-K env seraient plus élevés chez les patients atteints de SFC que chez les témoins sains. Cependant, nous ne voyons aucune différence dans les transcrits HERV-K contrôles sains Sans surprise, nous démontrons aucune corrélation entre la sévérité des symptômes du SFC et le niveau de transcrit HERV-K. La plupart des patients atteints du SSC notent qu’un syndrome pseudo-infectieux caractérisé par des symptômes pseudo-grippaux annonce l’apparition de la fatigue chronique [-,] de CFS, doit avoir eu lieu au moins mois avant un diagnostic CFS; par conséquent, au moment où un patient atteint de SFC consulte un médecin, la possibilité de mener des études sur les agents étiologiques au moment de l’infection aiguë a été perdue. Cependant, il existe des cas où une infection virale ou bactérienne aiguë a été bien documentée. le début de la fatigue et le développement du syndrome de fatigue chronique ont été confirmés par des études longitudinales [, -] HHV et HHV sont omniprésents dans notre population, avec un% de la population infectée asymptomatiquement comme de jeunes enfants. de HHV- et HHV- chez les adultes ne sont généralement trouvés chez les personnes immunodéprimées tels que les receveurs de greffe ou les patients infectés par le virus de l’immunodéficience humaine, montrant qu’il s’agit d’agents infectieux “opportunistes” Bien que certaines études antérieures ont montré une association de ces virus avec CFS , cela ne signifie pas que ces virus causent le SSC HHV- et HHV- pourraient être des spectateurs qui profitent des dysfonctions immunitaires Chez les patients atteints du SSC, des signes évidents de dysfonctionnement du système nerveux central (SNC) sont présents , et la plupart des agents infectieux liés au SFC sont neurotropes. De nombreux chercheurs ont postulé que les symptômes du SFC peuvent être causés par un immunologique. Attaque des agents infectieux dans le SNC Si cela était vrai, une étude sur la salive ou les PBMC pour la charge virale et l’expression de SAg rétrovirale endogène pourrait ne pas mesurer la pathologie centrale. En résumé, le but de cette étude était d’évaluer l’association possible de HERV-K Nous avons échoué à démontrer une différence dans les transcrits HERV-K env entre les patients atteints du SFC et les témoins sains dans cette cohorte, une cohorte plus définie de patients atteints du SFC avec des cas documentés de fatigue post-infectieuse peut donner un résultat différent Nos données ne supportent pas l’hypothèse de réactivation de HHV- ou HHV- dans CFS Nombre de copies virales de HHV- et HHV- dans la salive et les PBMC n’était pas différent entre nos patients CFS et nos contrôles en bonne santé

Remarques

Remerciements Nous remercions tous les participants à notre étude ainsi que le Dr Albert Tai pour ses conseils techniques et son soutien. Soutien financier Ce travail a été soutenu par la HHV- FoundationPotential conflits d’intérêts Tous les auteurs: Aucun conflit signaléTous les auteurs ont soumis le formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits potentiels d’intérêt Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués