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Haut niveau d’expression de Perforin dans les cellules T: un marqueur pronostique précoce de la gravité de la réactivation des herpèsvirus après la greffe allogénique de cellules souches chez les adultes

Contexte Les réactivations EBV et cytomégalovirus du virus Epstein-Barr sont des complications fréquentes de la greffe de cellules souches allogéniques hématopoïétiques en raison d’un manque de contrôle des lymphocytes T après immunosuppression. Le diagnostic précoce de réactivation et le traitement préventif subséquent reposent sur une mesure fréquente de la charge virale. Ici, nous avons étudié l’expression de la perforine dans les cellules T CD comme mesure de la capacité des cellules T cytotoxiques par rapport à l’apparition de méthodes de réactivation virale. Dans une étude prospective, nous avons surveillé les premiers mois après la transplantation et les charges virales mesurées en combinaison avec l’expression de la perforine intracellulaire dans les cellules T CD. Résultats L’expression médiane de la perforine dans les cellules T CD pendant le suivi était plus élevée chez les patients avec réactivation virale que chez les patients sans réactivation virale. P = Le pourcentage médian de cellules T CD exprimant la perforine chez les patients avec des réactivations virales élevées dépassant les copies / mL% était statistiquement significativement plus élevé que chez les patients avec des réactivations mineures de – copies%, que chez les patients avec des charges EBV détectables qui n’excédaient pas Les patients ayant des réactivations virales élevées ont atteint un pourcentage élevé de cellules T CD exprimant la perforine% plus souvent et plus rapidement que les patients ayant une charge virale faible ⩽ copies / mL ou sans réactivations virales Expression élevée de la perforine précédée de fortes charges viralesConclusion Les cellules T CD exprimant la perforine peuvent être utiles en tant que marqueur pronostique facile à mesurer pour identifier les patients à risque de réactivation virale sévère très rapidement après SCT

En raison d’un système immunitaire altéré, les réactivations d’herpesvirus sont fréquemment observées après transplantation de cellules souches hématopoïétiques allogéniques et peuvent causer des complications sévères à la fois le régime de conditionnement et l’épuisement des cellules T globuline antithymocyte in vivo ou in vitro avec l’application post-transplanter des médicaments immunosuppresseurs Les virus de l’Epstein-Barr EBV et cytomégalovirus CMV sont les causes les plus communes de maladies virales après SCT Les deux sont des herpèsvirus répandus qui persistent comme des infections latentes permanentes qui sont normalement contrôlées par des réponses de lymphocytes T cytotoxiques [- ] La surveillance fréquente des charges d’ADN EBV et CMV après la transplantation est utilisée pour détecter les réactivations virales et les infections, fournissant une base pour une thérapie préemptive pour prévenir les complications cliniques examinées dans Bien qu’une augmentation de la charge virale ait été un bon indicateur complications cliniques , la puissance de EBV et CMV charge En outre, pour le CMV, il a été démontré qu’un traitement précoce de la réactivation du CMV peut entraîner une maladie sévère du CMV à un stade beaucoup plus avancé, car la thérapie antivirale interfère avec la cellule T spécifique au CMV. reconstitution La mesure de la réponse cytotoxique des lymphocytes T peu après la transplantation pourrait aider à prédire l’évolution de la réactivation virale et indiquer si un traitement préventif peut être différé en cas de réponse T appropriée. Des réactifs spécifiques à HLA sont nécessaires, nous cherchons un marqueur qui représente les réponses des lymphocytes T cytotoxiques et peut être mesuré avec des techniques de laboratoire habituelles Perforin est l’une des molécules cytotoxiques libérées par les lymphocytes T CD et les cellules NK tueuses naturelles pour tuer les cellules cibles Son expression sur la maturation des cellules T est étroitement régulée après l’activation, et il a été démontré que les cellules T effectrices expriment les niveaux les plus élevés de la perforine intracellulaire Parce que ces cellules sont les plus importantes dans la restriction de la réactivation virale, nous avons postulé que le niveau de perforine dans les cellules T CD pourrait indiquer la capacité fonctionnelle d’une réponse antivirale. subissant SCT pendant les premiers mois après la transplantation et analysé la cinétique des cellules T perforine-positives en relation avec la réactivation virale

Méthodes

Caractéristiques du patient et de la transplantation Quarante patients recevant un SCT allogénique de janvier à octobre ont été suivis prospectivement pendant des mois après le SCT au Département d’Hématologie, University Medical Center Utrecht Patient et les caractéristiques liées à la transplantation sont décrites dans le tableau spasmodique. n = ou non apparenté n = donneur La source de cellules souches était principalement du sang périphérique n =, et pour la plupart des patients un régime de conditionnement non myéloablatif était utilisé n = In vivo l’épuisement des cellules T consistant en ATG était ajouté au régime de conditionnement pour les patients recevant des greffes de donneurs non apparentés ou donneurs HLA incompatibles Des prélèvements sanguins hebdomadaires ont systématiquement été effectués sur tous les patients afin de déterminer les charges EBV et CMV. Le plasma a été prélevé pour les analyses PCR EBV et CMV polymérase en chaîne, et le sang total restant a été utilisé dans cette étude. obtenus de tous les patients, conformément à la Déclaration de Helsinki

Surveillance du CMV et de l’EBV La surveillance CMV et EBV était basée sur un test PCR TaqMan CMV ou EBV ADN en temps réel dans du plasma traité à l’acide éthylène diamine tétraacétique EDTA , qui a été réalisée chaque semaine pour tous les patients jusqu’à plusieurs mois. Les patients ont été traités préventivement avec du valganciclovir mg deux fois par jour quand la charge d’ADN du CMV a dépassé les copies / mL et avec rituximab mg / m lorsque la charge d’ADN EBV a dépassé les copies / mL Valaciclovir a été administré à tous les patients prophylactiquement mg ​​deux fois par jour. Les cellules ont été lysées à l’aide d’une solution contenant du chlorure d’ammonium, de l’hydrogénocarbonate de potassium et des échantillons d’EDTA Après avoir obtenu des échantillons de sang total, les érythrocytes ont été lysés à l’aide d’une solution contenant du chlorure d’ammonium. ont été lavés avec du sel tamponné au phosphate supplémenté avec% de sérumalbumine bovine et% de cellules de sodiumazide ont été incubées avec de la CD-péridinine protéine de chlorophylle PerCP, CD-allophycocyanine APC-cyanine Cy, CD-APC BD Biosciences [BD], et CD Pacific Blue eBioscience Cells ont ensuite été perméabilisées et lysées pour la coloration de perforine intracellulaire FACS solution perméabilisante et solution de lyse FACS; BD Après perméabilisation, les cellules ont été incubées avec de la perforine isothiocyanate conjugué à la fluorescéine BD Les échantillons ont été mesurés sur une machine LSR II FACS BD, et au moins, des événements par échantillon ont été acquis. , version BD Le nombre médian de lymphocytes T CD acquis était, et la plupart des échantillons contenaient & gt; En dehors du matériel du patient, des échantillons sanguins anticoagulés au moyen d’EDTA ont été prélevés chez des volontaires sains en tant que témoins, afin de déterminer une plage de référence pour les niveaux de perforine dans les lymphocytes TPour déterminer le nombre absolu de lymphocytes T CD par millilitre de Du sang entier, des tubes Trucount BD ont été utilisés selon le protocole du fabricant. En bref, des ul de sang total ont été incubés avec CD-PerCP et CD-APC-Cy BD. Analyse statistique Tous les facteurs de risque liés à la transplantation pour le développement de la réactivation du CMV ou EBV ont été évalués en utilisant le test exact de Fisher. La valeur pronostique de la perforine en ce qui concerne le début et la fin la sévérité de la réactivation virale a été déterminée en utilisant le test U de Mann-Whitney, les graphiques de Kaplan-Meier et l’analyse de régression logistique Les facteurs de risque pour l’expression de perforine élevée ont été analysés en utilisant le test exact de Fisher pour l’analyse univariée et la régression de Cox pour l’analyse multivariée. Un niveau de probabilité de% P & lt; a été considéré comme significatif dans toutes les analyses Toutes les analyses statistiques ont été effectuées avec le logiciel SPSS, la version SPSS et le logiciel Prism, version GraphPad Software

Résultats

Patients Quarante patients ayant subi un SCT hématopoïétique allogénique de janvier à octobre ont été suivis prospectivement pendant les premières semaines après la transplantation. Tous les facteurs liés à la transplantation pouvant influencer le déclenchement de la réactivation EBV et / ou CMV ont été évalués en analyse univariée. Les patients ont été classés selon l’apparition de la réactivation et la charge virale maximale pour l’EBV ou le CMV a été atteinte au cours des premières semaines après la transplantation. Les patients chez qui les deux virus réactivés ont été classés selon la charge virale la plus élevée ont été atteints. La réactivation de l’EBV et / ou du CMV est survenue chez les patients La subdivision par catégorie de réactivation est représentée sur la figure. Les courbes de charge virale représentatives tout au long du suivi pour les patients avec réactivation faible et élevée sont montrées dans la figure B Aucune différence de sévérité de réactivation entre nd donneurs de MUD non apparentés ont été observés données non montrées

Figure View largeTélécharger slideRéponses du virus Epstein-Barr EBV et cytomégalovirus CMV Les patients ont été catégorisés en catégories de réactivation sur la base de la charge virale maximale de l’un ou l’autre virus dans le plasma pendant les semaines après transplantation de cellules souches n = ou avec EBV la charge n’excédait pas la limite de détection. copies / mL de plasma n = ont été classées comme n’ayant pas de réactivation Les patients avec des charges virales n’excédant pas des copies / mL ont été classés comme ayant de faibles réactivations n = Cinq patients ont eu une réactivation CMV seulement. La réactivation EBV seulement, et les patients avaient à la fois une réactivation EBV et CMV Le groupe à réactivation élevée comprenait des patients avec des charges excédant les copies / mL De ces patients, avait une CMV dépassant les copies / mL seulement, avait une charge EBV & gt; copies / mL et & lt; copies / mL en plus d’une charge de CMV excédant les copies / mL, et le patient avait une charge EBV et une charge de CMV dépassant les copies / mLFigure Voir grandTélécharger diapositive Virus Epstein-Barr EBV et cytomégalovirus Réactivation du CMV Les patients ont été catégorisés en catégories de réactivation sur la base de la charge virale maximale de l’un ou l’autre virus dans le plasma pendant les semaines après la transplantation de cellules souches Les patients ayant une charge virale indétectable n = ou avec une charge EBV n’excédant pas la limite de détection copies / mL de plasma n = ont été classés comme n’ayant pas de réactivation n = Cinq patients ont eu une réactivation du CMV seulement, le patient a eu une réactivation EBV seulement, et les patients ont eu une réactivation EBV et CMV Le groupe à réactivation élevée comprenait des patients avec une réactivation du CMV. charges dépassant les copies / ml de ces patients, avait une charge de CMV dépassant les copies / mL seulement, avait une charge EBV & gt; copies / mL et & lt; copies / mL en plus d’une charge de CMV excédant les copies / mL, et le patient avait à la fois une charge EBV et une charge de CMV excédant les copies / mL

Figure Vue largeTélécharger des graphiques représentatifs des charges virales et expression de la perforine dans les cellules T CD chez les patients de différents groupes de réactivation A, représentatif fluorescence activé par fluorescence des parcelles de perforation fluorescéine isothiocyanate FITC et CD-allophycocyanine APC-cyanine Cy expression pour les patients montre un patient sans réactivation virale jours après la transplantation Le bon diagramme à points montre un patient avec une réactivation virale élevée jours après la transplantation de cellules souches SCT Cytomégalovirus La réactivation CMV commence à ce moment-là charge virale, copies / mL Les valeurs dans le quadrant supérieur droit indiquent pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine B, Graphes représentatifs de la réactivation virale supérieure et expression de perforine dans les cellules T CD bas pour chaque groupe de réactivation patients sans réactivation virale, patients avec réactivation du virus Epstein-Barr [EBV] n’excédant pas la limite de détection, patients avec soit réactivation CMV ou EBV pas Le tableau supérieur montre les triangles noirs de charge CMV, l’axe vertical gauche et les carrés gris de charge EBV, l’axe vertical droit en copies par millilitre tout au long des semaines de suivi après SCT. Diagramme représentatif des charges virales et de l’expression de la perforine dans les cellules T CD chez des patients de différents groupes de réactivation A, Représentation représentative de la fluorescence Le diagramme de points de gauche montre un patient sans réactivation virale jours après la transplantation Le diagramme de points de droite montre un patient avec une réactivation virale élevée jours après la transplantation de cellules souches SCT La réactivation du CMV par le cytomégalovirus commence à ce moment-là, charge virale, copies / mL Les valeurs dans le quadrant supérieur droit indiquent le pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine B, Graphiques représentatifs de la réactivation virale supérieure et l’expression perforine dans les cellules T CD bas pour chaque groupe de réactivation patients sans réactivation virale, patients avec réactivation du virus Epstein-Barr [EBV] ne dépassant pas la limite de détection, les patients avec une réactivation CMV ou EBV n’excédant pas les copies / ml, et les patients avec réactivation EBV ou CMV excédant les copies / mL Le panneau supérieur montre les triangles noirs de charge CMV, l’axe vertical gauche et les carrés gris de charge EBV, Le tableau du bas montre le pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine dans les cercles noirs tout au long des semaines de suivi après l’augmentation de l’expression de la perforine intracellulaire dans les cellules CDT chez les patients présentant des réactivations virales. L’expression de la perforine intracellulaire a été mesurée dans les cellules T CD et les cellules NK hebdomadaires jusqu’à semaines après SCT figure A montre FACS plo représentatif Expression de la perforine dans les cellules T CD pour un patient sans réactivation virale et pour un patient avec une réactivation élevée Le pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine et les charges de CMV aux temps correspondants tout au long du suivi sont montrés dans la figure B. Les cellules T CD exprimant la perforine d’individus sains étaient% plage,% -% données non montrées Chez les patients sans réactivation virale, le pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine n’excédait presque jamais le pourcentage maximal de cellules T CD exprimant la perforine chez des individus sains Tous les patients ayant des réactivations virales présentaient des pourcentages de cellules T CD exprimant la perforine% pendant le suivi, atteignant jusqu’à% des cellules T CD. Figure En outre, les pourcentages de cellules T exprimant la perforine ont fluctué pendant le suivi, en particulier le groupe à haute réactivation Figure En outre, le début de la réactivation s’est produit à un moment différent après la SCT pour chaque patient. dans l’expression et l’occurrence variable de réactivation par rapport au temps après la transplantation, nous avons comparé les patients sur la base de l’expression de la perforine médiane pendant le suivi. L’expression médiane de la perforine dans les cellules NK ne différait pas entre patients avec et sans réactivation virale. Les cellules CD% de cellules CD exprimaient la perforine dans le groupe de réactivation, comparé à% dans le groupe de non-réactivation; P = et pour les cellules T CD-CD% dans le groupe de réactivation, comparé à% dans le groupe de non-réactivation; P = il n’y avait pas de différence significative Pour les cellules T CD, cependant, le niveau médian d’expression de la perforine était% de cellules T CD dans le groupe sans réactivations et% de cellules T CD pour les patients avec réactivations virales P = Figure A Ainsi, expression de perforine dans les cellules T CD et non dans les cellules NK est significativement augmenté chez les patients avec des réactivations virales

Cellules NK CD-CD et CD-CD; panneaux gauche et central et cellules T CDCD; L’expression de Perforin dans les cellules NK ou T a été déterminée par un tri cellulaire activé par fluorescence intracellulaire. FACS coloration de perforine combinée avec CD, CD ou CD La valeur médiane pour l’expression de perforine dans chaque type de cellule a été calculée pour chaque patient B, nombre absolu médian des cellules T CD par microlitre de sang comme déterminé par analyse Trucount à travers les semaines après SCT gauche et le nombre absolu médian de cellules T CD exprimant la perforine par millilitre de sang droit, tracé pour les patients avec et ceux sans réactivation virale Expression Perforin dans les cellules T déterminé par coloration FACS intracellulaire de perforine combinée à CD C, pourcentage médian de CD T exprimant la perforine, tracé pour chaque patient dans les différents groupes de réactivation pas de réactivation, patients avec réactivation EBV n’excédant pas la limite de détection, réactivation EBV ou CMV n’excédant pas copies / mL, et patients avec réactivation EBV ou CMV dépassant les copies / mL * P & lt; D, nombre absolu médian de cellules T CD exprimant la perforine par millilitre de sang total, tracé pour chaque patient dans les différents groupes de réactivation pas de réactivation, patients avec réactivation EBV n’excédant pas la limite de détection, réactivation EBV ou CMV n’excédant pas des copies / mL, et patients avec réactivation EBV ou CMV excédant les copies / mL * P = Les patients avec réactivations virales, cependant, ont eu des nombres absolus significativement plus bas de lymphocytes T CD pendant les premiers mois après SCT, comparés à ceux dans les patients sans réactivations virales. le nombre absolu de cellules T CD exprimant la perforine ne différait pas entre les patients avec des réactivations virales et ceux sans Figure B Pour explorer davantage les différences observées dans le pourcentage de cellules T CD exprimant perforine comme un marqueur potentiel de la réactivation virale, nous avons analysé si ce pourcentage corrélé avec le niveau de réactivation virale Nous avons subdivisé les patients dans les catégories définies précédemment w faible charge virale de pointe, – copies / mL et charge virale de pointe élevée, & gt; copies / ml réactivations et a comparé le niveau médian d’expression perforine tout au long du suivi dans chaque groupe Le pourcentage médian des cellules T CD exprimant la perforine dans le groupe avec des réactivations élevées% était significativement plus élevé que celui des patients avec des réactivations mineures%; P =, chez les patients avec des charges EBV détectables qui n’ont pas dépassé la limite de détection%; P =, et chez les patients sans réactivation%; P & lt; Figure C Il n’y avait aucune différence entre les catégories de réactivation pour les nombres absolus de cellules T CD exprimant la perforine. Figure D Il est intéressant de noter que les patients sans réactivation virale qui avaient parfois des titres viraux détectables n’excédant pas la limite de détection Cette observation dans ce sous-groupe spécifique est étudiée plus loin dans une plus grande cohorte Ainsi, ce n’est pas le nombre absolu mais le pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine qui semble être associé à Pour trouver une valeur limite pour l’expression de la perforine dans les lymphocytes T CD qui pourrait distinguer entre les patients avec et ceux sans réactivations virales, nous avons utilisé la gamme de référence de l’expression de la perforine dans CD T les cellules des individus sains% -% des niveaux de Perforin qui dépassent En utilisant l’analyse de Kaplan-Meier, nous avons comparé l’apparition et le moment de l’apparition de la réactivation virale entre les patients ayant une faible expression de perforine intracellulaire ne dépassant jamais le pourcentage de cellules T CD tout au long du suivi et Expression élevée de perforine intracellulaire excédant% de cellules T CD à un certain moment pendant les semaines après SCT Patients avec une forte expression percutanée intracellulaire n = réactivations expérimentées plus fréquemment que les patients avec de faibles niveaux de perforine intracellulaire n = P = Figure A Ensuite, nous avons étudié la À cette fin, nous avons subdivisé nos patients en différentes catégories de réactivation. Le groupe sans aucun ADN viral dans le plasma au cours des semaines après SCT n’a presque jamais dépassé% perforin. -expression des lymphocytes T CD Figure B L’incidence des cellules T CD CD exprimant Dans ces groupes, l’expression de% perforine a été observée dans plusieurs cas, mais la plupart du temps relativement tardivement pendant les jours médians de suivi; intervalle, – jours En revanche, tous les patients du groupe à réactivation élevée avaient une expression de la perforine supérieure à% de leur population de cellules T CD peu de temps après la transplantation, médiane, jours; distance, – jours Figure B

Figure Vue largeDownload slideAssociation entre niveaux élevés de perforine et charges virales élevées A, Incidence de la réactivation virale Les patients ont été regroupés sur la base d’une expression perforine excédant% de cellules T CD à tout moment pendant la période de suivi de la semaine. -Meier plot montre l’incidence de la réactivation virale pendant les jours de suivi après la greffe de cellules souches [SCT] chez les receveurs de SCT avec et sans pourcentage de cellules CD exprimant la perforine dépassant & gt;% à tout moment pendant leur semaine suivante B, Incidence du pourcentage de lymphocytes T CD exprimant la perforine Les patients ont été répartis en groupes sur la base de leur charge virale maximale pendant le suivi. Le graphique de Kaplan-Meier montre l’incidence du pourcentage de lymphocytes T CD exprimant la perforine au cours de la jours de suivi après SCT chez les receveurs de SCT par catégorie de réactivation copies / ml, maximum de copies / mL, – copies / mL, et & gt; Copies / mLFigure View largeDownload slideAssociation entre les niveaux élevés de perforine et les charges virales élevées A, Incidence de la réactivation virale Les patients ont été regroupés sur la base d’une expression de perforine dépassant% des cellules T CD à tout moment pendant la période de suivi. Le tracé de Kaplan-Meier montre l’incidence de la réactivation virale pendant les jours de suivi après transplantation de cellules souches chez les receveurs de SCT avec et sans pourcentage de cellules CD exprimant la perforine dépassant & gt;% à tout moment de leur semaine suivi B, Incidence du pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine Les patients ont été répartis en groupes sur la base de leur charge virale maximale pendant le suivi. Le graphique de Kaplan-Meier montre l’incidence du pourcentage de CD T exprimant la perforine. cellules pendant les jours de suivi après SCT chez les receveurs SCT par des copies de catégorie de réactivation / ml, maximum de copies / ml, – copies / mL, et & gt; copies / mLS Par la suite, nous avons étudié la capacité pronostique de perforine mesurée dans les premières semaines après SCT sur les réactivations virales élevées Bien que le début de la réactivation virale dans le groupe à haute réactivation médiane, jours après SCT; intervalle, – les jours ne différaient pas significativement de l’occurrence de la médiane d’expression de% perforine élevée, jours après SCT; range, – days Figure, l’expression de la perforine élevée précède toujours les charges virales excédant les copies / mL médian, jours; gamme, – jours Figures Figure et Figure

Figure View largeDownload slide Valeur pronostique de l’expression de perforine dans les lymphocytes T CD La figure montre une boîte et un quadrillage de patients du groupe à réactivation élevée qui trace le jour après la greffe de cellules souches SCT sur laquelle le pourcentage de cellules T CD exprimant la perforine dépasse% perforin & gt ;%, sur lequel le début de la réactivation virale est survenu réactivation de début, et sur lequel la charge virale a dépassé les copies / mL de charge dépasse les copies / ml La ligne horizontale au milieu de chaque boîte indique la médiane; les bordures supérieure et inférieure de la boîte indiquent les percentiles th et th, respectivement; et les moustaches au-dessus et au-dessous de la boîte marquent la gammeFigure Voir grandTélécharger la diapositive Valeur pronostique de l’expression de la perforine dans les lymphocytes T CD On voit une boîte et un moustache des patients dans le groupe à réactivation élevée qui trace le jour après la greffe de cellules souches. des cellules T CD exprimant la perforine excédaient% perforin%, sur lequel le début de la réactivation virale est survenu réactivation, et sur lequel la charge virale a dépassé les copies / mL de charge excédant les copies / mL La ligne horizontale au milieu de chaque boîte indique le médian; les bordures supérieure et inférieure de la boîte indiquent les percentiles th et th, respectivement; et les moustaches au-dessus et au-dessous de la boîte marquent la gamme

Discussion

créé par le régime de conditionnement et doit gagner de l’espace sur les cellules sanguines résidentes jusqu’à ce que le chimérisme du donneur soit établi Ceci pourrait déclencher des réponses immunitaires qui pourraient être réactives contre l’hôte, par exemple alloréactivité. transplantation d’organes pleins L’utilisation de l’expression perforine et granzyme comme marqueurs diagnostiques de lymphocytes T cytotoxiques activés dans la transplantation d’organes solides avait déjà été suggérée dans des lymphocytes exprimant -perforin infiltrant des tissus transplantés chez des transplantés cardiaques. En outre, il a été suggéré que le rapport entre perforine expression dans le sang périphérique dans les sous-populations TK et NK est un prédicteur de rejet aigu chez les transplantés rénaux Expression élevée de perforine et granzyme B mesurée par PCR de transcription inverse dans le sang périphérique a été associé à la fois cellule-moi le rejet lié à l’anticorps et à l’anticorps Le facteur lié à la transplantation qui active les réponses immunitaires Les lymphocytes T peuvent également être la cause de la réactivation virale Parce que cette réponse immunitaire peut impliquer une multitude de cellules immunitaires incluant par exemple les lymphocytes B, on pourrait envisager que les cellules B contenant les herpèsvirus latents EBV pourraient également être activées, ce qui pourrait conduire à la réactivation des virus latents. Cela correspondrait à des études antérieures suggérant un rôle actif du VIH dans le déclenchement et / ou le dérèglement des réponses des lymphocytes B lors d’une infection aiguë au VIH. le système immunitaire est toujours intact En outre, il se pourrait que l’activation des cellules endothéliales comme cellule cible commune dans la maladie du greffon contre l’hôte [GvHD] pourrait entraîner une réactivation du CMV. Nous avons donc vérifié si des pourcentages élevés de perforation Cependant, la GvHD aiguë n’était pas un facteur de risque pour un pourcentage élevé de cellules T exprimant la perforine, et les pics précoces de d’autre part, la réactivation virale commence évidemment avant qu’elle ne soit détectable dans le plasma Ainsi, les cellules T CD exprimant la perforine peu après la SCT pourraient être une réponse lymphocytaire T cytotoxique antiviral débutant contre une très Réactivation virale préliminaire Compte tenu du nombre inférieur de lymphocytes T CD absolus, ces patients avec réactivation pourraient compenser le faible nombre absolu de lymphocytes T CD en produisant un pourcentage plus élevé de lymphocytes T CD exprimant perforine, par rapport à celui des patients sans réactivation. Les résultats d’une étude en cours sur les réponses des cellules T spécifiques EBV et CMV au moyen de tests immunoenzymatiques à l’interféron γ montrent que les lymphocytes T spécifiques à EBV et CMV apparaissent seulement après le début des données de réactivation virale. par Meij et al a montré que les cellules T spécifiques de l’EBV n’apparaissent pas avant un mois après que SCTWe ait récemment effectué des analyses similaires dans un paramètre SCT pédiatrique; De manière surprenante, nous avons observé un niveau plus élevé de lymphocytes T CD exprimant la perforine pendant la clairance de la charge virale. A de Pagter et al, données non publiées Il existe des différences importantes entre les cohortes de patients qui peuvent expliquer la divergence apparente entre les données. la cohorte pédiatrique était principalement des réactivations de l’herpèsvirus humain HHV- Deuxièmement, cette réactivation survient très rapidement après la TCT Troisièmement, des schémas de conditionnement principalement myéloablatifs ont été utilisés chez les enfants, alors que la majorité des adultes ont reçu un conditionnement non myéloablatif. Étant donné que dans notre groupe de patients adultes, la plupart des patients étaient conditionnés de manière non myéloablative, nous pensons que le conditionnement myéloablatif entraînant une réactivation précoce du HHV peut expliquer la différence entre Les données observées En conclusion, nous avons montré que des niveaux élevés de lymphocytes T CD exprimant la perforine sont associés à la réactivation virale et que la hauteur du pic initial des cellules T CD exprimant la perforine peut prédire la sévérité de la réactivation. Nous émettons l’hypothèse que le niveau de cellules T CD exprimant la perforine est le résultat de un déclencheur initial lié à la transplantation qui est également associé à une mauvaise reconstitution des lymphocytes T, ce qui entraîne la sévérité de la réactivation virale. Bien que nous ne puissions pas utiliser la perforine comme mesure de «l’immunité induite», elle peut être utilisée pour prédire la sévérité d’une réactivation virale très rapidement après SCT, ce qui pourrait rendre inutile la surveillance de la charge virale à long terme. Chez les patients présentant des taux de perforine intracellulaire faibles après SCT, la surveillance de la charge virale peut être diminuée, alors que chez les patients présentant des taux élevés de perforine intracellulaire est une chance élevée de réactivation virale sévère et le suivi devrait se poursuivre Des études cliniques futures devraient être menées pour le prouver

Remerciements

Nous remercions Frank Miedema pour la lecture attentive du manuscrit et Wiebe Pestman pour des conseils statistiques Nous remercions le service de diagnostic de virologie du Centre médical universitaire d’Utrecht pour avoir recueilli tous les échantillons et fourni les données de charge virale. Fondation Anna et Maurits de Kock Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits