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SLCA autrefois Polymorphismes génétiques NRAMP associés à la tuberculose pédiatrique en Chine

ContexteLa tuberculose est un problème de santé publique urgent causé par l’infection à Mycobacterium tuberculosis De nombreux facteurs, y compris les facteurs génétiques de l’hôte, sont impliqués dans la pathogenèse de la tuberculose. Le gène SLCA anciennement NRAMP est un candidat primaire associé à la susceptibilité à la tuberculose.MéthodesNous avons examiné l’association entre les polymorphismes et la susceptibilité à la tuberculose. L’étude comprenait des patients pédiatriques atteints de tuberculose et des sujets témoins pédiatriques arbuthnotdrug.com. L’analyse de polymorphisme de longueur de fragment de restriction en chaîne de polymérase a été réalisée avec des échantillons sanguins pour distinguer les génotypes allèles d’INT d’un changement de nucléotide unique dans l’intron, le G / C et le Délétion de l’UTR TGTG dans la région non traduite, del dans le gène SLCA Les différences de fréquence génotypique ont été analysées chez les patients atteints de tuberculose et de sujets témoins. Résultats Nous n’avons identifié aucune différence statistiquement significative entre les groupes tuberculose et témoin en ce qui concerne la fréquence des variants de génotype G / C et C / C au locus INT La fréquence des variants de génotype TGTG / delete et TGTG delete / delete était significativement plus élevée dans le groupe tuberculosis que dans le groupe témoin au locus UTR Différences Les génotypes variables au locus UTR du gène SLCA ont été associés à la tuberculose pédiatrique chez les patients chinois. Le sexe du patient peut affecter le résultat. de l’infection à M tuberculosis chez les enfants

La tuberculose est causée par une infection à Mycobacterium tuberculosis et reste une des principales causes de mortalité dans le monde. L’infection tuberculeuse contribue à la mort de ~ millions de personnes chaque année dans le monde. La Chine a un taux particulièrement élevé d’infection tuberculeuse. décès par an Plus d’un tiers de la population mondiale est infectée par M. tuberculosis, mais seulement% développent une tuberculose clinique le développement de la tuberculose est affecté par de nombreux facteurs, dont la virulence, les facteurs environnementaux et divers facteurs de risque, Cependant, seule une minorité de patients atteints de tuberculose ont des facteurs de risque identifiables, ce qui suggère que les facteurs génétiques de l’hôte influencent le résultat de l’infection tuberculeuse. Les facteurs génétiques sont fortement impliqués dans la susceptibilité à la tuberculose, et l’immunité innée est fortement associée au contrôle de l’infection par M tuberculosis Macrophages sont la première ligne de défense contre l’infection à M tuberculosis M la tuberculose est reconnue par les macrophages hôtes et est phagocytée après infection, et la tuberculose invasive M sera éliminée ou supprimée par fusion phagosomale et lysosomale, induction de l’apoptose et radicaux libres. De nombreuses cytokines sont libérées Les gènes associés à la fonction des macrophages ont donc fait l’objet de nombreuses recherches récentes. De nombreux gènes candidats peuvent être impliqués dans le développement de la TB, y compris les antigènes leucocytaires humains et non humains SLCA a été le plus largement étudié. La première étude à décrire l’association entre les polymorphismes SLCA et la susceptibilité TB a été rapportée dans Des données supplémentaires ont été inconsistantes Plusieurs loci SLCA ont été étudiés de manière approfondie, y compris GTn dans le promoteur, INT changement de G → C dans l’intron , G / C, DN conservateur chanter le-base G → Une substitution au codon, entraînant un changement d’acide aspartique en asparagine, et une délétion UTR TGTG dans la région non traduite. Des études antérieures ont démontré que les loci GTn et INT et les loci DN et UTR étaient parfaits. Les différents polymorphismes SLCA peuvent avoir des effets cliniques différents. Certaines études ont révélé que les polymorphismes SLCA peuvent affecter le développement de la TB pédiatrique , tandis que d’autres ont Nous avons analysé les polymorphismes SLCA dans les locus INT rs et UTR rs avec une analyse de polymorphisme de longueur de fragment de restriction basée sur la PCR pour déterminer si les polymorphismes SLCA étaient associés à la TB pédiatrique.

Méthodes

Au total, des échantillons de sang ont été prélevés chez des patients pédiatriques atteints de tuberculose à l’Hôpital pour enfants de Beijing affilié à la Capital Medical University; Pékin, Chine; Ces cas représentaient les cas cliniques de cette étude. Tous les cas pédiatriques de TB ont été diagnostiqués sur la base des manifestations cliniques, de la détection de Mycobacterium et des examens radiographiques Aucun des patients n’avait d’antécédents cliniques de diabète sucré, d’infection VIH ou de traitement immunosuppresseur le groupe témoin comprenait des échantillons de sang prélevés chez des patients en chirurgie pédiatrique Les patients témoins n’avaient pas d’antécédents de TB, avaient des résultats d’examen radiographique normaux et avaient des résultats de test cutané PPD de & lt; Les sujets témoins appartenaient à l’ethnie Han Les caractéristiques des deux groupes sont indiquées dans le tableau Le consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les participants à la recherche, et l’étude a été approuvée par le Comité d’éthique. de l’hôpital pour enfants de Beijing

Caractéristiques de patients pédiatriques atteints de TB tuberculeuse et de patients témoinsSLCAgenotyping L’ADN génomique a été extrait de mL de sang périphérique anticoagulé par EDTA en utilisant le QIAamp DNA Blood Midi Kit Qiagen Deux loci de polymorphisme ont été prélevés chez des patients pédiatriques atteints de tuberculose tuberculeuse et de patients témoins. amplifié par PCR Les amorces pour chaque locus sont dérivées d’autres rapports, avec quelques modifications L’amorce sens pour le locus INT était ‘-CTCCCTGCCTCCTCACAGCTTCT-‘, et l’amorce antisens était ‘-CTTGGGATGCCCCATGTGAGA-‘ L’amorce sens pour ‘UTR locus était ‘-GGCATCTCCCCAATTCATGGTTG-‘, et l’amorce antisens était ‘-AACTGTCCCACTCTATCCTG-‘ Le produit de PCR pour la longueur du locus INT a été digéré par l’endonucléase restrictive Apa I New England Biolabs Le produit de PCR pour la ‘longueur du locus UTR-bp a été digéré par l’endonucléase restrictive FokI New England Biolabs A% gel d’agarose ele la ctrophorèse a été réalisée après la digestion pour définir différents génotypes en fonction des motifs de fragments générés Les génotypes spécifiques ont été distingués par différentes endonucléases de restriction

Analyse statistique Les données ont été analysées à l’aide du logiciel SPSS, version SPSS Le test was a été utilisé pour déterminer l’équilibre Hardy-Weinberg de la distribution du génotype, et les fréquences génotypiques entre les groupes ont été analysées. comparé à l’aide des OR tests with avec% CI ont été calculés La signification statistique a été définie comme une valeur P & lt;

Résultats

Patients et sujets témoins Les données des patients et des sujets témoins ont été incluses dans le tableau de l’étude. Il n’y avait pas de différences significatives entre les groupes d’âge et de sexe. Le groupe de cas comprenait les cas de TB pulmonaire active, de TB extrapulmonaire et de M infection tuberculeuse Tous les cas et les témoins ont été classés selon l’échelle de l’American Thoracic Society ATS pour étudier la distribution de différents génotypes à différents stades de la TB clinique. Les cas de tuberculose pulmonaire extrapulmonaire et active ont été classés en ATS et M tuberculosis. L’infection par Mycobacterium est très fréquente en Chine, et les enfants sont systématiquement vaccinés avec le vaccin contre le bacille de Calmette-Guérin. Les cas de contrôle ont été classés comme table de niveau ATS Analyse de l’équilibre de Hardy-Weinberg et association des polymorphismes SLCA avec la TB pédiatrique Chine Tous les génotypes SLCA étaient dans la table d’équilibre de Hardy-Weinberg Les fréquences des génotypes G / G, G / C et C / C au locus INT sont présentées dans le tableau La fréquence des génotypes variants G / C et C / C au locus INT était de% dans le groupe TB et de% dans le groupe témoin groupe Il n’y avait pas de différences significatives dans la distribution des fréquences génotypiques entre les groupes OR; % CI, -; P =, comme vu dans le tableau

L’association des polymorphismes dans SLCA avec tuberculose pédiatrique Les fréquences TBGenotype des polymorphismes TGTG /, TGTG / delete, et TGTG delete / delete au locus ‘UTR sont présentées dans le tableau La fréquence des génotypes variants TGTG / delete et TGTG delete / delete au locus ‘UTR était de% dans le groupe TB et de% dans le groupe témoin. Les génotypes variants étaient significativement associés à la TB TB pédiatrique; % CI, -; P =, comme indiqué dans le tableau Association des SLCApolymorphismes avec la TB pédiatrique en Chine stratifiée par sexe Distribution des génotypes SLCA a été analysée avec stratification par sex-table Les différences de distribution génotypique entre TB et groupes témoins ont été observées seulement chez les sujets femelles au locus UTR. était une fréquence plus élevée de génotypes variants dans le groupe TB que dans le groupe témoin OU chez les sujets mâles, [% IC, -; P =]; OU pour les sujets féminins, [% IC, -; P & lt;] Aucune différence significative n’a été observée au locus INT chez les sujets masculins OU; % CI, -; P = ou pour des sujets féminins OU; % CI, -; P =

Vue de la table LargeTélécharger la diapositiveRelationship entre les polymorphismes SLCA et la TB tuberculose pédiatrique dans un échantillon chinois, stratifié par sexTable View largeDownload slideRelationship entre les polymorphismes SLCA et TB tuberculose pédiatrique dans un échantillon chinois, stratifié par sexeDistribution des SLCApolymorphismes dans différents niveaux ATS de TB pédiatrique en Chine La distribution des polymorphismes SCLA entre les cas de tuberculose à différents niveaux ATS a également été analysée Aucune différence significative n’a été observée entre le niveau ATS et les sous-groupes, bien que la fréquence des génotypes variants semble être plus élevée chez les patients atteints de TB ATS.

Table View largeDownload slideDistribution des polymorphismes dans SLCA dans différents niveaux de tuberculose pédiatrique de l’American Thoracic Society ATS View largeDownload slideDistribution des polymorphismes dans SLCA dans différents niveaux ATS de tuberculose pédiatrique de l’American Thoracic Society en Chine

Discussion

De nombreux gènes candidats ont été signalés dans le développement de la tuberculose, y compris SLCA anciennement NRAMP, récepteur de vitamine D VDR, lectine liant le mannose MBL, et certains gènes de cytokines SLCA est le gène candidat principal pour la susceptibilité à la tuberculose parmi ces gènes candidats SLCA humain encode la protéine SLCA acides aminés, qui se trouve dans le compartiment endosomal / lysosomal macrophage endogène SLCA humaine influence la fonction phagolysosomale des macrophages dans le transport du fer, le maintien de l’acidité, et la production d’oxyde nitrique Certains chercheurs ont spéculé que SLCA est impliqué dans granulomateuse précoce et efficace réponses, qui sont critiques pour le confinement des charges bactériennes ou la propagation de l’infection pulmonaire à M tuberculosis La charge bactérienne pourrait aboutir à une TB clinique futureIl n’y a pas eu d’association cohérente des polymorphismes du gène SLCA avec la susceptibilité humaine à la TB et démontré que les polymorphismes du gène SLCA étaient associés à l’huma n La sensibilité à la tuberculose Les mêmes résultats ont été identifiés dans les populations chinoise, coréenne et japonaise Une méta-analyse a révélé que les polymorphismes du gène SLCA aux loci UTR et DN étaient associés à la susceptibilité à la tuberculose chez les personnes d’ascendance asiatique, y compris Les individus chinois Cependant, les locus associés n’étaient pas identiques Aucune corrélation n’a été identifiée dans les échantillons provenant d’individus blancs, taiwanais et brésiliens et d’individus de Hong Kong [,,] Les différences étaient dues à des différences ethniques et à des biopsies sélectives. associée à la TB pédiatrique La TB pédiatrique est cliniquement différente de la TB adulte et l’étude des effets des gènes sensibles sur la TB pédiatrique fournira des informations supplémentaires sur les mécanismes génétiques moléculaires impliqués dans le développement de la TB pédiatrique et contribuera également à la mise en place de des moyens efficaces pour prévenir la propagation de la tuberculose Ceci est particulièrement pertinent pour la diminution de la tuberculose chez les adultes Les données suggèrent que les fréquences des polymorphismes TGTG / delete et TGTG delete / delete au locus UTR dans SLCA étaient significativement plus élevées dans le groupe TB, suggérant que le locus UTR était associé à la susceptibilité TB chez les enfants chinois. Cependant, une autre étude chinoise a révélé que les polymorphismes SLCA étaient associés à la progression de la tuberculose mais non à la susceptibilité . Nos données ont indiqué qu’une grande proportion de cas étaient des extrapulmonaires sévères. TB Aucune différence statistiquement significative n’a été observée entre les cas de TB pulmonaire active et les cas de TB extrapulmonaire non montrés, et il est possible que les polymorphismes SLCA soient associés à la progression de la TB chez les enfants. varie sur la base du sexe Par conséquent, la présente étude a analysé Les résultats ont révélé une association significative entre le locus UTR et la TB chez les filles. Des études ont suggéré que, pendant leur période de reproduction, les femmes perdent du fer, ce qui entraîne une quantité limitée de fer. ions dans les phagosomes pour la production de radicaux hydroxyles et l’activité bactéricide Notre étude a impliqué des enfants âgés de & lt; années qui ne perdaient pas de fer corporel Il est possible qu’un gène lié au sexe soit impliqué dans la modification du développement de la TB Le sexe peut être un modificateur dans le développement de la TB, et des recherches supplémentaires doivent être effectuées pour clarifier les effets biologiques du sexe. plus élevé chez les patients atteints de TB latente avec un statut ATS, comparé à ceux qui ont eu une TB active, bien que cette différence ne soit pas statistiquement significative La petite taille de l’échantillon pour le groupe d’infection tuberculeuse latente réduit notre capacité à détecter une différence statistiquement significative entre les groupes. Les patients de niveau ATS devraient être inclus dans de futures études pour démontrer si les individus avec des variants de génotypes étaient plus sensibles à l’infection à M tuberculosis M infection tuberculeuse provoque la tuberculose latente dans l’enfance et peut conduire à la tuberculose clinique à l’âge adulte Certaines études suggèrent que la variation SLCA peut affecter sa fonction et entraîner une élimination insuffisante de M tuberculosis chez les mac rophages M tuberculosis peut être latent dans les macrophages hôtes et peut réactiver lors du déclin du système immunitaire de l’hôte à l’âge adulte Ces variantes chez les patients pédiatriques peuvent entraîner une maladie clinique plus tard dans la vie. et il est nécessaire d’observer des cas hétérozygotes pour confirmer le développement de la tuberculose clinique dans le futur

Remerciements

Soutien financier La Fondation nationale des sciences naturelles de Chine Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits